Com es veuen els microorganismes sota el microscopi?

Docent 

Fernández-Coll, Llorenç; Perona-Vico, Elisabet; López-Siles, Mireia

Centre educatiu

Universitat de Girona

Any de presentació a Ciència entre tots

2024

Llistat de material necessaris

1. Cultius bacterians Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis
2. Plaques d’agar nutritiu
3. Incubador
4. Porta objectes
5. Nansa de sembra
6. Flama de Bunsen o metanol (fixació de la mostra)
7. Cristall violeta
8. Lugol o iode
9. Etanol 95º
10. Aigua
11. Safranina alcohòlica
12. Microscopi òptic
13. Oli d’immersió

Com ho fem?

La tinció de Gram permet l’observació dels bacteris sota el microscopi distingint entre bacteris Gram-positius i Gram-negatius. Primer de tot farem créixer els cultius bacterians en plaques d’agar nutritiu a una temperatura constant de 37ºC mitjançant un incubador. Un cop crescudes les colònies, fem un frotis bacterià amb una nansa de sembra agafant una de les colònies que tenim a les plaques de cultiu i l’estenem sobre una gota d’aigua en un portaobjectes. Seguidament fixem la preparació a la flama (sense cremar la mostra). Afegim una gota de cristall violeta, la deixem durant 30 segons i n’eliminem l’excés. Durant aquest pas tenyirem els dos tipus de cèl·lules per igual. Afegim el lugol (o iode) i esperem 1 minut. Decolorem les cèl·lules amb etanol 95º durant 20 segons. En aquest pas, només es decoloren els bacteris Gram-negatius. Rentem el portaobjectes amb aigua i afegim la tinció de contrast, safranina alcohòlica durant 1 minut (es tenyeixen les cèl·lules Gram-negatives, prèviament decolorades). Tornem a rentar amb aigua, assequem la preparació a la flama i observem al microscopi.

Què observem?

Sota el microscopi podrem observar les dues coloracions diferents, lilosa o rosada en funció de si el bacteri és Gram-positiu o Gram-negatiu. Aquesta tinció també permetrà observar la morfologia cel·lular.
Què ha passat durant el procés de tinció? La diferencia de coloració ve donada pel tipus de paret cel·lular que presenta cadascun dels bacteris. Les cèl·lules Gram-positives, tenen una paret cel·lular de peptidoglicà més gruixuda, mentre que en les Gram-negatives aquesta paret de peptidoglicà és més prima. Durant la tinció de Gram, primer es fa una tinció amb cristall violeta i lugol, que penetra en tots els tipus de cèl·lules bacterianes. Seguidament, s’usa l’etanol per fer el procés de decoloració. Aquest alcohol deshidrata la paret de peptidoglicà de manera que la fa més permeable, però donades les característiques de la paret de peptidoglicà més gruixuda de les cèl·lules Gram-positives, l’alcohol no completa aquest procés de deshidratació impedint que penetri a l’interior de la cèl·lula, deixant el complex cristall violeta-lugol a l’interior de les cèl·lules que es veuran de color lila. En canvi, sí que penetra les cèl·lules Gram-negatives, les quals queden decolorades i seguidament aconsegueixen la coloració rosada gràcies a la safranina que s’afegeix seguidament en l’últim pas. Així doncs, aquelles cèl·lules Gram-positives es mantenen violeta pel lugol i el cristall violeta, mentre que les cèl·lules Gram-negatives adquireixen la coloració rosada per la safranina.

Paraules clau

Tinció de Gram, microscopi, bacteris

Grau de dificultat

Normal

Durada de l'experiència

2 dies

La podem reproduir utilitzant materials casolans/quotidians i no perillosos?

No

Veure vídeo